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Multiphoton Confocal Microscope System

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Confocal multifotónico simplificado para captura de imágenes multifotónica más profunda y rápida.

El microscopio confocal A1 MP+ multifotón de Nikon es un exclusivo sistema de captura de imágenes multifotónica que cuenta con un escáner galvanométrico de alta resolución. Los nuevos detectores de 4 canales de espectro amplio con mayor sensibilidad, corriente oscura reducida y amplia gama espectral permiten la separación en tiempo real de sondas estrechamente separadas para las imágenes espectrales exactas y de alto contraste. Esto es de especial importancia en un microscopio multifotónico debido al traslapo del espectro de emisión de las sondas y la autofluorescencia, lo cual es a menudo inevitable cuando se utiliza una línea láser simple.

  • Más profundidad
    • NDD de alta sensibilidad
    • Captura de imágenes de 1300nm
  • Más nitidez
    • Objetivos de alta AN
    • Alineación automática del láser
  • Flexible
    • NIC Elements C
    •  

Key Features

Imágenes de la muestra en profundidad con detectores de alta sensibilidad de espectro amplio (NDD)

Las emisiones de fluorescencia desde la profundidad de una muestra están altamente distribuidas en la excitación multifotónica, por lo tanto, el detector convencional que utiliza un microorificio no puede capturar imágenes fluorescentes brillantes. El NDD episcópico del A1R MP+ está localizado cerca de la apertura posterior del objetivo para detectar la cantidad máxima de las señales de emisión distribuidas a partir de la profundidad de las muestras vivas.

Imagen en vivo de las áreas profundas de la corteza cerebral de un ratón

Se estudió la corteza cerebral de un ratón de 5 semanas de vida en la línea H con el método craneal abierto. La forma completa de las dendritas dentro de las células piramidales en la capa V que expresan el EYFP se visualizaron desde la capa inferior a la capa superficial. De igual forma, se estudió la señal de fluorescencia de la sustancia blanca en áreas más profundas.

A1R-MPplus_NDD
Izquierda  Imagen de reconstrucción en 3D  

Fotografía con la colaboración de:
Dr. Tomomi Nemoto, Instituto de Ciencia Electrónica, Universidad de Hokkaido
Dr. Shigenori Nonaka, Instituto Nacional para la Biología Básica

Dr. Takeshi Imamura, Escuela de Medicina,
Universidad Ehime

Derecha     Imágenes de apilamiento en z      
  Parte superior:
dendritas en capas superficiales en las células piramidales de la capa en V, a 25 µm de la superficie
 
  Parte intermedia:
dendritas basales en las células piramidales de la capa V 625 µm de la superficie
 
 

Parte inferior:

fluorescencia de la sustancia blanca
Longitud de onda de excitación: 950 nm
Objetivo: apocromático CFI75 de 25 aumentos W MP (AN 1.10 D.T. 2.0)

 

Imágenes multicolor de la corteza cerebral del ratón

deep-imaging_6
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Adquisición simultánea de tres canales en un ratón YFP-H anestesiado mediante la excitación IR de 950 nm y la generación harmónica de segundo  (SHG) de las imágenes y dos emisiones fluorescentes. 
Cian: señal SHG de duramadre
Amarillo: neuronas piramidales EYFP en la capa V de la corteza 
Rojo: vasos sanguíneos etiquetados con SRB

Fotografiada con la colaboración de:
Drs. Ryosuke Kawakami, Terumasa Hibi y Tomomi Nemoto, Instituo de Investigación para la Ciencia Electrónica, Universidad de Hokkaido

Imágenes con representación de volumen 3D

Representaciones de volumen tridimensional de un riñón etiquetado con un marcador Hoxb7/myrVenus (Chi et ál, 2009, Genesis), con representación de volumen de pseudocolor con código de profundidad para la  referencia de profundidades Z (pseudocoloreado por profundidad - paso de 1 μm para 550 μm).

A1R-MPplus_NDD_2

Objetivo: apocromático CFI de 25 aumentos de W MP, aumento de exploración: 1 aumento, tamaño de paso Z: 1 μm, longitud de onda de excitación de IR: 930 nm
Resolución de las imágenes: 1024x1024 píxeles, volumen de las imágenes: 460 μm (largo) x 460 μm (ancho) x 600 μm (alto)
Fotografía con la colaboración del Dr. Frank Costantini y la Dr. Liza Pon, Centro Médico de la Universidad de Columbia, Nueva York


Imágenes de 1300 nm

Además del GaAsP de NDD compatible con una longitud de onda de 1080 nm, existe un nuevo modelo para los microscopios verticales compatible con una longitud de onda de 1300 nm. Este nuevo NDD permite la captura de imágenes profundas hasta 1.4 mm en combinación con un nuevo cabezal de escaneo A1R MP+ compatible con una longitud de onda de 1300 nm.

Imágenes cerebrales profundas de un ratón en vivo con el GaAsP de NDD, compatibles con la longitud de onda de 1300 nm.

gaasp1

Fotografiada con la colaboración de: Drs. Ryosuke Kawakami, Terumasa Hibi y Tomomi Nemoto, Instituto de Investigación para la Ciencia Electrónica, Universidad de Hokkaido

Imágenes en vivo de un ratón YFP-H anestesiado (de 4 semanas) con el método de cráneo abierto. Visualización de las neuronas piramidales de la capa V completa y las neuronas más profundas del hipocampo. Captura de imágenes profundas para captar imágenes tridimensionales de dendritas del hipocampo, hasta 1.4 mm dentro del cerebro.

Captado con GaAsP NDD episódico para 1300 nm y lente objetivo apocromático CFI75 de 25 aumentos W MP1300 (AN 1.10, D.T. 2.0 mm)
Longitud de onda de excitación: 1040 nm

Imágenes a color dobles de un ratón en vivo con el GaAsP de NDD, compatibles con la longitud de onda de 1300 nm

gaasp2

Se estudió la corteza cerebral de un ratón YFP-H anestesiado (4 semanas) con el método de cráneo abierto.
Se inyectó alexa594 en la vena caudal para visualizar el vaso sanguíneo.

Fotografiada con la colaboración de: Drs. Ryosuke Kawakami, Terumasa Hibi y Tomomi Nemoto, Instituto de Investigación para la Ciencia Electrónica, Universidad de Hokkaido


Los objetivos de alta AN de Nikon son ideales para captura de imágenes multifotónica

Se han desarrollado objetivos de alta AN que corrigen en gran medida las aberraciones cromáticas en una amplia gama de longitudes de onda: de ultravioleta a infrarrojo. La transmisión se incrementa por medio del uso de la exclusiva tecnología de recubrimiento de nanocristales de Nikon.

En particular, los lentes objetivo aprocromáticos CFI75 de 25 aumentos W MP/MP1300 proporcionan una apertura numérica líder en la industria de 1.10 y mantienen una distancia de trabajo de 2.0 mm, también tienen un collar que corrige las aberraciones esféricas según la profundidad del espécimen y un ángulo de acceso de la pipeta del manipulador de 33°, por lo cual son ideales para la captura de imágenes multifotónica profunda y aplicaciones de investigación en fisiología.
El recubrimiento de nanocristales es una tecnología de recubrimiento de lentes exclusiva de Nikon, que utiliza una película de nanopartículas delgada con un índice de refracción ultrabajo para la industria de los semiconductores. La estructura de las partículas del recubrimiento de nanocristales reduce notablemente el escape de las reflexiones en una amplia gama de longitudes de onda para producir imágenes con mayores coeficientes de señal-ruido (S/R).

high-NA1

CFI75 Apochromat 25xW MP CFI Apochromat LWD 40xWI λS

high-NA2

CFI Apochromat 40xWI λS CFI Plan Apochromat IR 60xWI

Objectives for multiphoton microscopy

CFI75 Apochromat
 25xW MP1300
NA 1.10 WD 2.0 Nano Crystal Coat
CFI75 Apochromat
 25xW MP
NA 1.10 WD 2.0 Nano Crystal Coat
CFI Apochromat LWD
 40xWI λS
NA 1.15 WD 0.6 Nano Crystal Coat
CFI Apochromat
 40xWI λS
NA 1.25 WD 0.18 Nano Crystal Coat
CFI Plan Apochromat
 IR 60xWI
NA 1.27 WD 0.17 Nano Crystal Coat

Alineación automática del láser al cambiar la longitud de onda de excitación multifotónica

Auto Laser Alignment

Cuando se cambia la longitud de onda del láser multifotónico o la precompensación de la distribución de la velocidad del grupo, también puede cambiar la orientación posicional del rayo láser multifotón en la apertura posterior del objetivo, lo que genera una intensidad desigual a través de la imagen o una ligera desalineación entre las trayectorias de luz láser visible e IR.

Siempre ha sido difícil verificar la orientación del rayo láser IR y fijar la alineación. La función de alineación automática del láser del A1R MP+, ubicada en la unidad óptica incidente para la trayectoria de la luz de excitación multifotónica maximiza automáticamente las alineaciones del láser IR en un solo clic en el software NIS-Elements C.


Mayor flexibilidad y facilidad de uso

El software de control NIS-Elements C permite el control integrado del sistema de captura de imágenes confocal, el microscopio y los dispositivos periféricos con una interfaz sencilla e intuitiva. También existen diversas y confiables funciones de análisis disponibles.

La integración de sistemas del microscopio invertido Ti-E ideal para captura de imágenes multimodo es accesible para equipar el sistema de microscopía confocal con el sistema de microscopio N-SIM/N-STORM de súper resolución, el sistema TIRF, el detector espectral y el sistema Perfect Focus. Todos los sistemas pueden controlarse mediante una sola plataforma de NIS-Elements.



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