Ртутные и ксеноновые дуговые лампы часто используются в качестве источников освещения для большого количества различных исследований в широкопольной флуоресцентной микроскопии. Посетители могут поупражняться в юстировке и фокусировке горелки в ртутной или ксеноновой лампе с помощью данного интерактивного руководства, которое моделирует способ юстировки лампы во флуоресцентном микроскопе.

Подробнее смотрите [здесь]

 Nikon производит иммерсионное масло для микроскопии двух типов - А и NF. Эти масла протестированы для использования с объективами Nikon, поэтому результаты не могут быть гарантированы при использовании объективов других фирм. Показатели преломления других масел могут отличаться, что может привести к худшим результатам, чем при использовании данных масел с объективами Nikon. Важно также отметить, что масла не следует смешивать, так как это отрицательно повлияет на результаты.

Тип А является универсальным иммерсионным маслом, используемым для таких методов наблюдения, требующих иммерсионного масла, как светлое поле, темное поле, фазовый контраст и флуоресценция. Оно производится объемами 8 мл, 50 мл и 500 мл и поставляется с пипеткой для нанесения на соответствующую поверхность. Для просмотра спецификации [нажмите здесь].

ТипNF является иммерсионным маслом высшего сорта, специально предназначенным для улучшения отношения сигнал/шум во флуоресцентной микроскопии, особенно при низком освещении и в диапазоне между 340 и 380 нм, что обычно важно при визуализации кальция или УФ-облучении дальнего спектра. Улучшение качества обеспечивается за счет используемого в масле сырья, которое вызывает снижение автофлуоресценции, вызванной присутствующими в масле минеральными веществами. Оно производится только объемом 50 мл и поставляется с пластиковой пипеткой для нанесения на соответствующую поверхность. Масло является чуть более вязким и имеет легкий запах. Для просмотра спецификации [нажмите здесь]. Для получения более подробной информации об иммерсионном масле [нажмите здесь]

Чтобы приобрести иммерсионное масло, найдите дилера Nikon в разделе «Где купить»

То, какая именно лампочка вам нужна, зависит от ряда факторов, которые приведены ниже. Нити накаливания и проводимость лампочек специально разрабатываются для использования в микроскопии. Это не только обеспечивает более высокую равномерность освещения, но и увеличивает срок службы лампочек. Поэтому Nikon рекомендует использовать только специально предназначенные для этого лампочки.

Вольфрамовая (W), галогенная, ртутная (Hg), ксеноновая (Xe), или галоидная

 Выбор лампочки из вышеперечисленных определяет тип необходимого освещения, но тип лампочки зависит от типа осветителя, в который эта лампочка будет устанавливаться

Напряжение и мощность

Обычно это является наиболее важными показателями, наравне с моделью микроскопа и типом лампочки. Обычно эти данные нанесены на оригинальной упаковке или на цоколе лампочки.

Форма

После того, как вы определили необходимый тип освещения, вам нужно определить форму лампочки. Обычно лампочки бывают овальными, круглыми и с отражающей поверхностью (рефлекторные). Примеры форм лампочек приведены далее.

Тип микроскопа

Обычно для определения типа лампочки достаточно знать модель микроскопа и тип освещения. Типы освещения включают в себя флуоресцентное, диаскопическое, указку.

Чтобы приобрести лампочку, найдите дилера Nikon в разделе «Где купить»

Из-за огромного количества имеющихся на рынке объективов выбрать правильный вариант для своей конкретной области применения может оказаться сложной задачей.

В этом руководстве содержится информация об основных типах объективов и приводятся критерии выбора наиболее подходящего объектива для вашей конкретной области применения, начиная с базовой светлопольной микроскопии до самых передовых конфокальных исследований и изучений процессов в живых клетках.

Классы объективов

Объективы делятся на 3 основные группы – ахроматы, флуориты и апохроматы.

Обычно, объективы-ахроматы и планахроматы предназначены для фокусирования синего цвета (длина волны около 486 нм, также известно как линия f) и красного цвета (656 нм, линия с) в одной и той же плоскости, за счет чего достигается коррекция осевых хроматических аберраций. Они идеально подходят для базовой светлопольной микроскопии и также являются самыми недорогими объективами.

Флуориты или планфлуориты являются объективами следующего уровня; они производятся из стекла со специальным покрытием, которое обеспечивает более высокий коэффициент пропускания и, следовательно, более яркие изображения. Помимо осевой коррекции красного и синего, объективы-флуориты также обычно корректируют зеленый (588 нм, также известно как линия d) и сферические аберрации.

Объективы самого высокого уровня – это планапохроматы. Помимо описанных выше коррекций, планапохроматы также проводят коррекцию в линии g (436 нм). Кроме того, компания Nikon представила серию планапохроматов с коррекцией в фиолетовой области, которые также проводят коррекцию в линии h (405 нм), за счет чего обеспечивается полная коррекция 5 линий от 405 до 656 нм. Апохроматы обычно являются самыми дорогими объективами, так как они обеспечивают самые четкие изображения с наименьшей хроматической аберрацией.

Для получения дальнейшей информации о классах объективов щелкните здесь

Методы наблюдений Светлое поле

Светлое поле

Ахроматы, флуориты или апохроматы могут использоваться для работы по методу светлого поля. С помощью планапохроматов получаются самые лучшие изображения, хотя и при работе с планахроматами и планфлуоритами можно добиться высоких результатов в зависимости от области применения и бюджета.

Флуоресценция

Работа по методу флуоресценции обычно требует использования либо объективов-планфлуоритов, либо планапохроматов. Выбор идеального объектива для работы по методу флуоресценции сильно зависит от каждой конкретной задачи. Например, если образец излучает очень слабый флуоресцентный сигнал, следует применять объективы-флуориты.

Передовые наблюдения по методу флуоресценции и наблюдение живых клеток

Для активации и получения изображений флуоресцентных зондов, таких как CFP, GFP, YFP, Cherry –FP, Tomato FP, PA-GFP, Kaede и PS-CFP, рекомендуется использовать объективы-планапохроматы с коррекцией в фиолетовой области. Осевая хроматическая аберрация в них была скорректирована вплоть до фиолетовой области (405 нм), что делает данные объективы очень эффективными для использования с PA-GFP, а также с другими фотоактивируемыми и фотопереключаемыми белками, которые активируются при облучении светом 405 нм. Без коррекции в области фиолетового активация и получение изображений нескольких зондов происходит в слегка различных плоскостях. Оптика CFI Plan Apochromat VC также является отличным выбором для особо важных конфокальных задачk.

Объективы Plan Apochromat VC отлично работают не только в фиолетовой области спектра, но также и в инфракрасной, что позволяет глубже проникать в образец. Они также полезны для метода получения изображения глубоко лежащих клеток с помощью квантовых точек.

Графики показывают различия осевых фокальных положений синих флуорохромов при использовании стандартного объектива и объектива с коррекцией в области фиолетового. Также следует отметить увеличение отношения сигнал/шум.

TIRF

При работе по методу флуоресценции полного внутреннего отражения объективы Apo TIRF от Nikon обеспечивают минимальную глубину затухающего поля, какую только можно достичь с помощью объективов с масляной иммерсией. Объективы Apo TIRF обеспечивают коррекцию хроматических аберраций в диапазоне длин волн от 435 нм до 1064 нм и имеют числовую апертуру 1,49. Кроме того, у них отличное пропускание в ИК-области, за счет чего можно получать изображения и фиксировать излучение отдельных молекул в одной и той же плоскости фокусировки.

PФазовый контраст

Nikon предлагает целый ряд объективов для работы по методу фазового контраста, каждый из которых оптимально подходит для работы с соответствующими препаратами.

Объективы DL (Dark Low) обеспечивают темный контур изображения на светло-сером фоне и подходят для наблюдения препаратов с большими разностями фаз, например, клеток. Эти объективы очень часто выбирают для работы по методу фазового контраста.

Объективы DDL (Dark Low Low) можно использовать для работы по различным методам, включая ДИК, светлое поле, темное поле и флуоресценцию.

Объективы ADL (Apodized Dark Low) уменьшают эффект гало, который часто возникает при наблюдениях по методу фазового контраста, и позволяют получать изображения препаратов, например, клеток, с бóльшей детализацией.

Объективы DM (Dark Medium) подходят для наблюдения препаратов с очень маленькими разностями фаз, например, гранул и тонких волокон.

ДИК - Дифференциальный интерференционный контраст

Для наблюдений по методу ДИК требуются специальные объективы, которые используются в дополнение к имеющейся ДИК-призме. Обычно это объективы Plan Apo или Plan Fluor. Однако чтобы убедиться в том, что вы выбрали подходящий для вашей задачи объектив, проконсультируйтесь с представителем Nikon.

Поляризованный свет

Для наблюдений в поляризованном свете необходимы объективы без натяжения, чтобы устранить нежелательные оптические эффекты на стеклянных элементах объектива, вызванные физическими силами, также известные как «натяжения».

Другие факторы

Длинное рабочее расстояние

Рабочее расстояние определяется как расстояние от передней части объектива до покровного стекла препарата, когда он находится в фокусе. Для областей применения, которые требуют использования микроманипуляторов, или для наблюдения живых клеток в клеточной культуре, которые необходимо просматривать через стенки толстых сосудов, желательно использовать объективы с длинным рабочим расстоянием.

Мультииммерсия - (препараты с масляной, водной, глицериновой иммерсией или без нее)

Гибкий объектив часто используется вместе с иммерсионными объективами высокого разрешения в качестве «компаньона» для работы с более низким увеличением, особенно в конфокальной микроскопии.

Водное погружение – (Препараты без покровного стекла)

Объективы с водным погружением предназначены для непосредственного погружения в чашку с клеточной культурой и обычно имеют более низкую числовую апертуру, чем объективы с водной иммерсией. В сочетании с длинным рабочим расстоянием объективы с водным погружением являются хорошим выбором для задач с микроманипуляцией.

Водная иммерсия – (Препараты с покровным стеклом)

Когда необходимо наблюдать за глубоко лежащими в препарате клетками или тканями, объективы с водной иммерсией обеспечивают лучшее разрешение и коррекцию аберраций. Поскольку они предназначены для работы с покровным стеклом, оптический путь в них продолжает оставаться симметричным во время прохождения света от клеток (вода) к стеклу (покровное стекло), снова к воде (иммерсионная среда), и затем снова к стеклу (объектив).

Коррекционные кольца

Коррекционные кольца позволяют оператору настраивать определенные параметры оптики, такие как толщина покровного стекла, иммерсионная среда, показатель преломления, температура и глубина проникновения в ткань, за счет чего достигаются оптимальные результаты.

Чтобы подробнее обсудить свои потребности, найдите дилера Nikon в разделе «Где купить».

Существуют сотни комбинаций, состоящих из различных типов камер и микроскопов. При выборе адаптера c-mount вам необходима следующая основная информация:

Какова марка и модель вашего микроскопа?

Эта информация является важной, так как у микроскопов различных производителей различные фокальные положения (точки, при которых данные изображения будут собираться на чипе камеры). У современных микроскопов название модели обычно нанесено на корпус, иногда рядом с серийным номером. Как вариант, производитель микроскопа должен суметь идентифицировать микроскоп по его описанию или по фотографии.

Какова марка и модель камеры, которую вы хотите подключить?

Это важно знать, так как это обычно определяет тип резьбы или соединения, которые должен иметь адаптер c-mount.

Какой порт вы будете использовать?

Не всегда можно подключить камеру через специальный порт камеры (который иногда называют тринокулярным тубусом или лучерасщепителем). Важно определить, какой порт будет использоваться для адаптера c-mount.

Необходимо ли увеличение?

Чип камеры (ПЗС) обладает определенными размерами и требует соответствующего увеличения внутри адаптера c-mount, который иногда называют оборачивающей линзой. Как показывает практика, обычно исходят из того, что, каков бы ни был размер ПЗС, кратность увеличения переходника подбирается исходя из размера матрицы, представленного в виде десятичной дроби, чтобы заполнить все поле зрения. Например, 2/3-дюймовый ПЗС (0.67”) требует адаптера c-mount 0,7х. Производитель должен всегда указывать размер ПЗС.

Всегда стоит помнить, что чем меньше увеличение, тем больше поле зрения и ярче изображения при более коротких экспозициях. Чтобы посмотреть, как размер влияет на изображение, щелкните здесь.

Чтобы подробнее обсудить свои потребности, найдите дилера Nikon в разделе «Где купить»

Это зависит от флуоресцентных зондов, которые вы планируете использовать в конкретном наблюдении.

Блок светофильтров состоит из возбуждающего фильтра, дихроичного лучерасщепителя (зеркала) и заграждающего (или эмиссионного) фильтра, которые должны быть соотнесены с длинами волн возбуждения и излучения вашего зонда (зондов). Перед тем, как выбрать сочетания соответствующих фильтров / дихроичных зеркал, вам необходимо знать длины волн возбуждения и излучения ваших зондов. Эту информацию предоставляет поставщик зондов.

Для более быстрого и простого выбора блока светофильтров Nikon в соответствии с конкретными флуоресцентными зондами [нажмите здесь]

Для получения дальнейшей информации о сочетаниях флуоресцентных фильтров [нажмите здесь]

Чтобы подробнее обсудить свои потребности, найдите дилера Nikon в разделе «Где купить»

С развитием цифровых технологий выросло количество имеющихся на рынке фотокамер и усложнился процесс их выбора. Несколько лет назад, особенно для любительских камер, количество пикселей считалось главным показателем при выборе оптимальной камеры. Сегодня понимание стало глубже, и перед тем, как приобрести подходящую камеру, необходимо ответить на некоторые вопросы. Чтобы помочь вам в выборе оптимальной камеры для решения ваших задач, мы привели ряд вопросов, ответив на которые, вы поймете, какая камера подходит именно вам.

Любительская камера или камера для микроскопии

Основной фактор при ответе на данный вопрос – это цена и удобство в использовании. Часто любительская камера приобретается для микроскопических исследований, чтобы сэкономить, а также потому, что у нее много пикселей и потому что ее можно легко использовать для других задач, помимо микроскопии. По отдельности это все отличные качества, однако, они не помогут вашей системе микроскопии получить максимально качественные изображения.

В погоне за увеличением числа пикселей любительские камеры часто используют более дешевые ПЗС, в которых велика вероятность большого числа дефектных пикселей. Такие дефектные пиксели проявляются в виде горячих, застрявших или мертвых пикселей.

Специальные камеры для микроскопии обычно имеют бóльший размер пикселей, и соответственно меньшее количество пикселей в ПЗС. Однако более крупные пиксели обеспечивают более высокое отношение сигнал/шум и более высокое качество изображений.

Используемые в любительских камерах стекла и объективы не предназначены для совместного использования со стеклом, применяемым в микроскопии. Специальные камеры не имеют стекла, являющегося неотъемлемой частью системы, и соответственно их совместимость выше благодаря специальному адаптеру c-mount.

Любительские камеры обычно имеют заданные функции, которые не могут быть отключены, т.е. увеличение резкости и повышение контраста. Специальные камеры больше подходят для более передовых методик наблюдения благодаря специальному программному обеспечению и таким технологиям, как телемикроскопия..

Монохромная или цветная камера

Обычно этот вопрос встает, когда на первый план выходит чувствительность или скорость. Перед тем, как определить, какой тип камеры вам нужен, вы должны определить, чего вы хотите добиться.

В камерах с одной ПЗС или монохромных камерах отдельные пиксели не связаны с каким-либо определенным цветом. Монохромные камеры обычно имеют более крупные пиксели, что неизменно означает меньшее количество пикселей на ПЗС. За счет этого увеличивает чувствительность и скорость, с которой они могут регистрировать данные об изображениях. По этой причине такие камеры больше подходят для флуоресцентных наблюдений, т.е. документирования клеточных взаимодействий.

Цветные камеры используют цветные фильтры, которые перекрывают пиксели и являются красными, зелеными или синими. Это особенно широко применяется там, где особое значение имеет точность цветовоспроизведения, т.е. при наблюдении окрашенных образцов ткани или в поляризационной микроскопии.

Размер пикселей или количество пикселей

ПЗС обычно производятся в трех размерах - 1/3”, 1/2” и 2/3”. Так как размер ПЗС – фиксированный, ключевым моментом является использование пространства соответствующими пикселями.

Чем больше количество пикселей в ПЗС, тем более детальная информация может быть получена. Это особенно важно для работы при низких увеличениях или для макронаблюдений. Однако при этом дефекты пикселей будут сильнее влиять на качество изображения, и более высокий уровень шума будет также отрицательно влиять на качество изображений.

Чем больше размер пикселей, тем меньшее их количество вмещается на ПЗС, за счет чего достигается более высокая чувствительность. Это подходит для работы при высоких увеличениях, где регистрируется изображение меньшего пространства, или для наблюдений, требующих высокого отношения сигнал/шум.

Разрешение или скорость

Это самая большая проблема выбора в микроскопии. Так как существует необходимость регистрировать все больше информации и, соответственно, требуется все более высокое разрешение, скорость получения сигнала неизменно уменьшается.

Быстрые системы получения изображений используют охват меньшей площади или меньшего количества пикселей, что увеличивает скорость передачи кадров.

Чем быстрее регистрация, тем меньше времени имеется для получения подробной информации, и, следовательно, разрешение или объем получаемых данных уменьшается.

Опция охлаждения ПЗС

Для еще большего увеличения отношения сигнал/шум можно приобрести камеру с охлаждаемым ПЗС.

ПЗС либо охлаждается до определенной температуры, либо до температуры, установленной на определенный уровень ниже температуры окружающей среды.

Охлаждение чипа позволяет уменьшить интерференцию, вызванную колебаниями температур и шумом.

Охлаждаемые ПЗС имеются у монохромных и у некоторых цветных камер.

Чтобы подробнее обсудить свои потребности, найдите дистрибьютора Nikon в разделе«Где купить»