Résolution | Résolution

Mots clés: confocal, N.A., signal-to-noise-ratio, fluorescence, deconvolution, depth-of-field, objectives, condenser, oil-immersion objectives, water-immersion objectives

Définition:La résolution peut être définie comme la distance la plus courte entre deux points à laquelle ils apparaissent comme deux points distincts plutôt que comme un seul point flou

TECHNOLOGIE:

Globalement, la puissance de résolution d'un microscope optique se situe dans la région de 0,2 micron environ. Il est cependant possible d’identifier des caractéristiques plus petites à l’aide de sondes fluorescentes. En microscopie, la résolution dépend de la qualité du système optique du microscope et de la longueur d’onde de la lumière utilisée pour construire l’image. Les longueurs d'onde plus courtes offrent une meilleure résolution.

L’ouverture numérique (O.N.) détermine la puissance de résolution d’un objectif mais la résolution totale du microscope dépend également d’autres composants tels que l’O.N. du condenseur, le bon alignement de tous les composants du système et le milieu d’imagerie (voir objectifs à immersion dans l’huile et immersion dans l’eau). En général, la résolution augmente avec le grossissement mais la combinaison d’une grande O.N. et d’un haut facteur de grossissement peut avoir pour résultat une faible profondeur de champ et une distance de travail courte.

La résolution est liée au contraste et la « netteté » de l’image, qui sont à leur tour limités par le rapport signal-bruit. Il existe un certain nombre d’algorithmes qui, appliqués grâce à un logiciel de déconvolution de traitement d’image, permettent d’améliorer la netteté perçue et l’interprétation des images.

APPLICATIONS:

La résolution détermine ce que l’utilisateur du microscope sera en mesure de distinguer et est donc d’une importance vitale dans les applications d’imagerie : plus la résolution du système est élevée, plus il est possible de déterminer des renseignements à partir de l’image. Le niveau de résolution requis dépend de l’application d’imagerie. Cependant, la plupart des microscopes sont utilisés avec succès en dessous de leurs capacités de résolution totales. Pour les applications de fluorescence les plus exigeantes, par exemple lorsque l’on utilise un faible éclairage et/ou des échantillons épais, l'imagerie confocale peut fortement améliorer la résolution (en comparaison avec les techniques à large champ) en bloquant la lumière floue provenant du dessus et du dessous du plan de mise au point. Pour l’imagerie des cellules vivantes, une bague de correction de température permet de corriger les changements provoqués par la température sur l’indice de réfraction de l’huile d’immersion, qui pourraient sinon entraîner des phénomènes d'aberration sphérique.

CONFIGURATION DU MICROSCOPE:

Non applicable. Les paramètres les plus importants pour optimiser la résolution d’un microscope sont la qualité du système optique et la bonne configuration et le bon alignement du système.

SYSTÈME RECOMMANDÉ:

Le système optique corrigé à l’infini CFI60 de Nikon combine de grandes O.N. et de longues distances de travail dans ses objectifs, offrant ainsi une optique haute résolution pour n’importe quelle application.

LIENS:

Optique à l'infini CFI60: [microscopyu] 

O.N., distance de travail et autres propriétés des objectifs: [microscopyu]